基因擴增儀工作原理與不同類型應(yīng)用領(lǐng)域
PCR儀即基因擴增儀,主要是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成,用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復(fù)制。其原理為利用升溫使DNA變性,用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進而達到基因復(fù)制的目的。
PCR儀的反應(yīng),主要是先將DNA加熱變性, 將雙股的DNA加熱后轉(zhuǎn)為單股DNA以做為復(fù)制的模板。 再將Primers冷卻至55~60℃,附著于模板DNA兩端,最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下加熱,進行引物的延長及DNA的合成。
PCR儀目前按照擴增的目的和檢測的標準,主要分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀等。普通PCR儀要做不同的退火溫度需要多次運行,梯度PCR儀可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度進行擴增。原位PCR儀用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細胞內(nèi)基因擴增儀。實時熒光定量PCR儀增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng)得出量化的實時結(jié)果輸出。
PCR技術(shù)被廣泛地應(yīng)用于生命科學研究、食品衛(wèi)生、醫(yī)療、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測等諸多方面,包括科研、臨床、用戶試劑、進口試劑、定性或定量等各種條件要求的PCR實驗。