在下述的內(nèi)容中,小編將會對基因芯片的相關消息予以報道,如果基因芯片是您想要了解的焦點之一,不妨和小編共同閱讀這篇文章哦。
一、基因芯片技術原理
基因芯片技術是生物芯片的一種,它是生命科學領域里興起的一項高新技術,它集成了微電子制造技術、激光掃描技術、分子生物學、物理和化學等先進技術。
基因芯片技術的原理主要如下:
1、DNA探針的大量收集和純化,基因芯片探針制備方法可以是根據(jù)基因設計特異性的PCR引物,對基因進行特異性地擴張,也可以是建立均一化的cDNA文庫,通過克隆鑒定、篩選、擴增產(chǎn)生;
2、將純化后的探針固定在片基上,首先要將基片(主要用的是玻璃片)進行特殊的化學處理,使玻璃片醛基化或氨基化,然后將純化的探針通過顯微打印或噴打在基片上,再將打印好的玻璃片進行后處理,如水合化、加熱或紫外交聯(lián)等;
3、樣品的標記,標記的方法一般是采用逆轉(zhuǎn)錄法或隨機引物延伸法等;
4、雜交后芯片的掃描、圖像處理的采集和數(shù)據(jù)分析。
二、基因芯片研究方向及當前面臨的困難
通過上面的介紹,想必大家對基因芯片技術的原理已經(jīng)具備了初步的認識。在這部分,我們主要來了解下基因芯片的研究方向以及在當前環(huán)境下基因芯片的發(fā)展所面臨的困難。
盡管基因芯片技術已經(jīng)取得了長足的發(fā)展,得到世人的矚目,但仍然存在著許多難以解決的問題,例如技術成本昂貴、復雜、檢測靈敏度較低、重復性差、分析泛圍較狹窄等問題。這些問題主要表現(xiàn)在樣品的制備、探針合成與固定、分子的標記、數(shù)據(jù)的讀取與分析等幾個方面。
樣品制備上,當前多數(shù)公司在標記和測定前都要對樣品進行一定程度的擴增以便提高檢測的靈敏度,但仍有不少人在嘗試繞過該問題,這包括 Mosaic Technologies 公司的固相 PCR 擴增體系以及 Lynx Therapeutics 公司提出的大量并行固相克隆方法,兩種方法各有優(yōu)缺點,但目前尚未取得實際應用。
探針的合成與固定比較復雜,特別是對于制作高密度的探針陣列。使用光導聚合技術每步產(chǎn)率不高( 95% ),難于保證好的聚合效果。應運而生的其它很多方法,如壓電打壓、微量噴涂等多項技術,雖然技術難度較低方法也比較靈活,但存在的問題是難以形成高密度的探針陣列,所以只能在較小規(guī)模上使用。最近我國學者已成功地將分子印章技術應用于探針的原位合成而且取得了比較滿意的結(jié)果(個人通訊)。
目標分子的標記也是一個重要的限速步驟,如何簡化或繞過這一步現(xiàn)在仍然是個問題。
目標分子與探針的雜交會出現(xiàn)一些問題:首先,由于雜交位于固相表面,所以有一定程度的空間阻礙作用,有必要設法減小這種不利因素的影響。 Southern 曾通過向探針中引入間隔分子而使雜交效率提高于了 150 倍。其次,探針分子的 GC 含量、長度以及濃度等都會對雜交產(chǎn)生一定的影響,因此需要分別進行分析和研究。
信號的獲取與分析上,當前多數(shù)方法使用熒光法進行檢測和分析,重復性較好,但靈敏仍然不高。正在發(fā)展的方法有多種,如質(zhì)譜法、化學發(fā)光法等?;?a href="/tags/芯片" target="_blank">芯片上成千上萬的寡核苷酸探針由于序列本身有一定程度的重疊因而產(chǎn)生了大量的豐余信息。這一方面可以為樣品的檢測提供大量的驗證機會,但同時,要對如此大量的信息進行解讀,目前仍是一個艱巨的技術問題。
最后,小編誠心感謝大家的閱讀。你們的每一次閱讀,對小編來說都是莫大的鼓勵和鼓舞。最后的最后,祝大家有個精彩的一天。