以下內容中,小編將對蛋白質芯片的相關內容進行著重介紹和闡述,希望本文能幫您增進對蛋白質芯片的了解,和小編一起來看看吧。
一、蛋白質芯片
蛋白質芯片是一種新型的生物芯片,能夠進行高通量的蛋白功能分析。該技術實現的基礎是蛋白探針在固相支持物(載體)表面的大規(guī)模集成,利用樣品中標記或未經標記的靶蛋白分子與探針進行反應,然后通過熒光法、放射性同位素法或無標記檢測法等相應的方法進行檢測,最后由計算機分析結果, 獲得高豐度表達蛋白。蛋白質芯片的特異性強,敏感性高,并且具有高通量、重復性好、應用性強等優(yōu)點,也面臨著一些挑戰(zhàn),例如需要大量的蛋白質探針,且探針蛋白的空間結構和活性影響著蛋白質芯片的穩(wěn)定性和保質期, 檢測的特異性也受到相似蛋白在交叉配對上的影響。
二、蛋白質芯片應用
通過上面的介紹,想必大家對蛋白質芯片已經具備了初步的認識。在這部分,我們主要來了解一下蛋白質芯片諸多應用中的其中兩個應用。
(一)基因表達的篩選
AngelikaL.等人從人胎兒腦的cDNA文庫中選出92個克隆的粗提物制成蛋白質芯片,用特異性的抗體對其也進行檢測,結果的準確率在87%以上,而用傳統(tǒng)的原位濾膜技術準確率只達到63%。與原位濾膜相比,用蛋白質芯片技術在同樣面積上可容納更多的克隆,靈敏度可達到pg級。
(二)抗原抗體檢測
生活中,很多人會出現過敏現象。有的過敏原因比較常見且容易觀察推斷,如花粉過敏、柳絮過敏;有的過敏原因比較“奇葩”,如有人聞到茄子的味道會過敏。這時,便需要排查過敏原。
規(guī)避過敏的第一步,就是要了解過敏原。而目前國內檢查過敏原的方式還較為傳統(tǒng),且單次檢查數量有限,因此只有高通量和一次多標的才能實現篩查的臨床意義。
在CavinM.等人的實驗中,蛋白質芯片上的抗原抗體反應體現出很好的特異性,在一塊蛋白質芯片上10800個點中,根據抗原抗體的特異性結合檢測到唯一的1個陽性位點。Cavin M.指出,這種特異性的抗原抗體反應一旦確立,就可以利用這項技術來度量整個細胞或組織中的蛋白質的豐富程度和修飾程度。其次利用蛋白質芯片技術,根據與某一蛋白質的多種組分親和的特征,篩選某一抗原的未知抗體,將常規(guī)的免疫分析微縮到芯片上進行,使免疫檢測更加方便快捷。
篩選及研究
常規(guī)篩選蛋白質主要是在基因水平上進行,基因水平的篩選雖已被運用到任意的cDNA文庫,但這種文庫多以噬菌體為載體,:通過噬菌斑轉印技術(plaque life procedure)在一張膜上表達蛋白質。但由于許多蛋白質不是全長基因編碼,而且真核基因在細菌中往往不能產生正確折疊的蛋白質,況且噬菌斑轉移不能縮小到毫米范圍進行,所以這種方法的局限性,靠蛋白質芯片彌補。酶作為一種特殊的蛋白質,可以用蛋白質芯片來研究酶的底物、激活劑、抑制劑等。
蛋白質芯片為蛋白質功能研究提供了新的方法,合成的多肽及來源于細胞的蛋白質都可以用作制備蛋白質芯片的材料。Uetz將蛋白質芯片引入酵母雙雜交研究中,大大提高了篩選率。建立了含6O0O個酵母蛋白的轉化子,每個都具有開放性可閱讀框架(Open Reading Frame,0FR)的融合蛋白作為酵母雙雜交反應中的激活區(qū),此蛋白質芯片檢測到192個酵母蛋白與此發(fā)生陽性反應。
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