美國(guó)科羅拉多州立大學(xué)Robert E. Cohen研究小組:高親和力游離泛素傳感器
美國(guó)科羅拉多州立大學(xué)Robert E. Cohen研究小組取得一項(xiàng)新突破。該研究組描述了一種基于親和力的熒光傳感器,該傳感器能夠特異性結(jié)合游離泛素分子,解離常數(shù)Kd值小于60pM,加上新開(kāi)發(fā)的工作流,使得研究者能夠在細(xì)胞裂解物中區(qū)分和量化游離的、連有蛋白質(zhì)的和巰基酯形式的泛素。
據(jù)介紹,泛素(Ub)連接是一種十分重要的翻譯后修飾,幾乎影響真核生物內(nèi)的所有蛋白質(zhì)。泛素化的功能和機(jī)制得到了廣泛地研究,然而其動(dòng)力學(xué)和游離(未連接的)泛素分子調(diào)節(jié)機(jī)制還知之甚少,其中一個(gè)主要障礙是缺乏簡(jiǎn)單可靠的技術(shù)來(lái)量化細(xì)胞內(nèi)泛素化水平,及監(jiān)控結(jié)合物中泛素分子的釋放。另外,通過(guò)傳感器染色,研究者通過(guò)顯微鏡在固定細(xì)胞內(nèi)觀測(cè)到了游離泛素。通過(guò)傳感器實(shí)時(shí)分析,能夠十分靈活且精密地測(cè)定任何(多)泛素連接物的去泛素化。
他們的最新研究提出了高親和力游離泛素傳感器,能夠準(zhǔn)確定量泛素穩(wěn)態(tài)和去泛素化。 相關(guān)論文于2019年8月2日發(fā)表在《自然—方法學(xué)》上。